超凈工作臺在獼猴桃組織培養(yǎng)繁殖與工廠化育苗實驗中的應用

   植物組織具有無限增殖和產(chǎn)生不定芽、不定根的能力。在培養(yǎng)條件適宜時，用一個芽可以培養(yǎng)出許多植株來。其在保持優(yōu)良砧木及品種種性、進行工廠化育苗方面具有很好的意義。其方法步驟如下。

    一、外植體接種與材料消毒

    取田間當年生新梢或一年生枝蔓，去葉，用肥皂水將表面刷洗，并用自來水沖洗干凈，剪成一芽一段，放入干凈燒杯，拿進超凈工作臺；先用70%酒精過一下，無菌水（用高壓鍋，在120℃下，滅菌30分鐘的水）沖洗3遍；再用0.1%升汞液消毒5～10分鐘，無菌水沖洗3遍；然后用酒精燈火焰消毒過的工具（鑷子、剪刀、撥針、解剖刀等）剝?nèi)[片、葉柄，取出帶數(shù)個葉原基的幼芽接入培養(yǎng)基，半包埋。

    培養(yǎng)基配好后裝入廣口的罐頭瓶、三角瓶或試管，裝入量為1～2厘米高。120℃滅菌30分鐘后備用。

    外植體接種后放到培養(yǎng)室的培養(yǎng)架上培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為：光照1000勒克斯，8～10個小時，暗14～16小時；溫度25～28℃。培養(yǎng)1～2周，即可看出是否消毒徹底，有無感染。及時檢查，將未感染的外植體轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)瓶內(nèi)，丟棄已感染的外植體。

    二、繼代繁殖

    上述接入的外植體培養(yǎng)1～2個月，即可長到2～3厘米長。在超凈工作臺上，將其剪成約1厘米長莖段，接種到新的培養(yǎng)基中（培養(yǎng)基的配方同上）。剪莖段時所用工具和培養(yǎng)皿（或牛皮紙）都要經(jīng)過消毒，消毒方法分別同上述酒精燈消毒法和高壓消毒法。

    其后，大約每25天左右進行一次繼代培養(yǎng)。每次的莖段增殖量約為3～4倍。反復進行，直到所需數(shù)量。

    三、生根

    上述培養(yǎng)的莖段長到2厘米以上時，即可用于生根。生根培養(yǎng)基的成分為上述培養(yǎng)基的大量元素減半，除激素和蔗糖外，其他成分不變。

    生根培養(yǎng)基配好后也需高壓滅菌（120℃，30分鐘）后使用。

    生根培養(yǎng)20天左右，莖段上即可長出根，成為完整苗。生根苗長到3～5厘米長時即可鍛煉、移栽。

    四、生根苗的鍛煉、移栽

    （一）鍛煉

    組培苗在人工培養(yǎng)條件下長期生長，對自然生長環(huán)境的適應性減弱。移栽前需要一個過渡階段，即鍛煉。鍛煉方法為：將培養(yǎng)瓶移至自然光照下2～3天，打開瓶口2～3天，再移栽。

    （二）移栽

    移栽時先洗凈根上培養(yǎng)基，避免培養(yǎng)基感染雜菌致苗死亡。移栽方法及灌水、遮陽等管理同實生苗移栽。但注意組培苗比較嬌嫩，需輕盈操作。

    五、工廠化育苗

將上述培養(yǎng)基制備及超凈工作臺相關(guān)、裝瓶、消毒、無菌苗增殖、生根、鍛煉、移栽等過程全部放在實驗室和溫室中進行，即為工廠化育苗。目前，這樣的生產(chǎn)線已在意大利和法國投入使用。但外植體接種尚需人工操作。

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